Анализ на фасциолез

Серологическое исследование: Fasciola hepatica/gigantica IgG

Серологический анализ проводят для диагностирования фасциолеза с целью выявления в крови пациента иммунные антитела IgG к антигенам Fasciola hepatica/gigantica.

Фасциолезом называется опасное паразитарное заболевание, поражающее печень и желчевыделительную систему, «виновниками» которого являются два вида плоских червей (трематод) - Fasciola hepatica (двуустка печеночная) и Fasciola gigantica (двуустка гигантская). Этот вид гельминтов обитает на берегах водоемов, его промежуточный хозяин - улитка. Фасциолез - это одно из наиболее распространенных видов паразитарной инвазии домашнего скота (коров, овец, коз), инфицирование происходит при поедании загрязненной растительности. В человеческий организм двуустки попадают с зараженной салатной зеленью, известны случаи инфицирования при употреблении недостаточно прожаренной печени.

У человека острый фасциолез характеризуется невыраженными, стертыми признаками, больные жалуются на высокую температуру, боли в области эпигастрия, снижение аппетита, тошноту, потерю веса, одышку, кашель, расстройство стула, увеличение печени, появление желтухи.

При хроническом течении инфекции клинические проявления могут отсутствовать, изредка больных беспокоят приступы панкреатита или печеночной колики. Тяжелые случаи паразитарной инвазии приводят к повреждению стенок желчных протоков и желчного пузыря, вследствие чего развивается атрофия печеночной ткани и цирроз.
br />Отсутствие специфичных симптомов затрудняет диагностику фасциолеза. Наиболее информативной методикой выявления заражения двуустками является серологический анализ, позволяющий обнаружить в крови пациента иммунные антитела IgG к антигенам Fasciola hepatica/gigantica.Диагностировать фасциолез на начальной стадии довольно затруднительно, поскольку гельминт начинает продуцировать яйца по прошествии трех месяцев пребывания в человеческом организме. В этой связи исследование дуоденального содержимого и анализ кала в ранний период инфицирования не способны распознать патогенные организмы. В отличие от данных методов лабораторной диагностики, серологическое исследование позволяет достоверно диагностировать фасциолез спустя 2-3 недели после заражения. Именно этот период необходим для формирования антител IgG-класса, появляющихся в русле крови в ответ на внедрение в организм печеночного сосальщика. Наибольшая концентрация IgG-антител отмечается в острый период инвазии, после чего их уровень со временем снижается, однако незначительное количество антител будет сохраняться в крови на протяжении жизни.

Показания для назначения анализа

Основным показанием для проведения иммунологического анализа является диагностирование фасциолеза. Практикующие специалисты назначают его при:

• подозрении на инфицирование пациента двуусткой печеночной/гигантской;
• наличии у пациента холецистита, холангита, гепатита неясного происхождения.

Когда проводится анализ

Проведение исследования на обнаружение антител IgG-класса к Fasciola hepaticagigantica показано при наличии у пациента характерных для фасциолеза симптомов: высыпания на коже как при крапивнице, общее недомогание, подъем температуры до 40 градусов, болезненность печени при пальпации, желтушность кожи, слизистых и склер, недобор веса у детей, повышение уровня печеночных ферментов и билирубина, в анализе крови - эозинофилия, лейкоцитоз, увеличение скорости оседания эритроцитов. 

Также анализ проводится:

• для дифференциальной диагностики фасциолеза и токсико-пищевой инфекции, брюшного тифа, гельминтозами, имеющими миграционную фазу;
• профилактического обследования лиц, употребляющих мясо животных и речную рыбу в сыром или плохо обработанном виде.

Подготовка к анализу

Накануне серологического анализа пациенту нужно выполнить следующие требования:

• воздержаться от курения, переедания, приема спиртных напитков;
• сократить психоэмоциональные и физические нагрузки;
• сдать кровь следует натощак, до выполнения других медицинских манипуляций;
• в течение двух дней до анализа исключить употребление жирной пищи (способна спровоцировать хилез крови);
• продолжительность периода воздержания от пищи перед тестированием должна составлять не меньше 8 часов. Ужин перед анализом должен быть легким, низкокалорийным. В день анализа можно пить очищенную воду;
• детей возрастом до 5 лет перед анализом на протяжении получаса необходимо поить кипяченной водой маленькими порциями;
• 15 минут до момента забора крови следует посидеть, полностью расслабившись;
• обо всех принимаемых медикаментах требуется извещать врача.

Не рекомендуется проводить анализ:

• ранее чем по прошествии двух недель после окончания курсового лечения на основе антибактериальных препаратов;
• ранее чем через неделю после прохождения рентгена, флюорографии, биопсии, иных видов инструментального обследования, массажа и физиотерапевтических манипуляций.

Методика выполнения анализа

Для диагностирования фасциолеза биологическим материалом является плазма венозной крови. Забор производят в утреннее время в лабораторных условиях. Для обнаружения в исследуемом образце биоматериала антител класса G используют иммуноферментный анализ, основанный на специфическом взаимодействии чужеродных антигенов с иммунными антителами.

Иммуноферментное исследование проводится поэтапно и подразумевает выполнение следующего алгоритма действий:

• Центрифугирование. Для того чтобы отделить плазму крови от иных ее элементов, пробирка с биоматериалом помещается в специальный аппарат, где происходит ее вращение на высокой скорости. Именно в плазме сосредоточены все вырабатываемые иммунными клетками антитела, в связи с чем она подвергается исследованию. 
• Работа с планшетом. Отделенная плазма извлекается из пробирки при помощи стерильного медицинского шприца, после чего, также шприцом, ее равномерно распределяют по лункам полистиролового планшета. В лунки вносится конъюгат, содержащий в своем составе антигены к Fasciola hepaticagigantica. 
• Инкубация. Для формирования иммунных комплексов антиген-антитело необходимо создать температурные условия, аналогичные нормальной температуре человека. С этой целью рабочий планшет помещают в прибор для инкубации. 
• Фотокалориметр. Завершающий этап анализа – обнаружение антител и подсчет их концентрации. Для этого планшет с исследуемой плазмой и конъюгатом отправляют в фотокалориметр, который выявляет сформировавшиеся иммунные комплексы и искомые антитела путем просвечивания жидкости. Бланк результатов выдается аппаратом, что минимизирует вероятность получения недостоверных значений. 

Расшифровка анализа

Иммуноферментный анализ является качественный, его итоги выдаются в следующих значениях:

• «отрицательно» - антитела IgG не выявлены, инвазия Fasciola hepatica/gigantica отсутствует;
• «сомнительно» - характеризует ранний период паразитарного поражения, требуется повторное обследование спустя 10-14 дней;
• «положительно» - указывает на текущий или перенесенный ранее фасциолез.

Анализ крови на антитела IgG к двуустке печеночной является вспомогательным методом выявления фасциолеза и не может явиться единственным критерием, положенным в основу диагноза. Во внимание также принимаются клинические проявления заболевания, результаты других пройденных обследований, включая инструментальные, при необходимости выполнения таковых.

Отрицательные результаты тестирования не могут расцениваться в качестве неопровержимого факта отсутствия поражения организма фасциолезом, поскольку их получение также может быть обусловлено:

• проведением анализа в начальный период развития инфекционного процесса. Антитела формируются спустя лишь две недели после внедрения в организм двуустки печеночной, соответственно при тестировании в более ранние сроки вполне закономерно, что специфические иммуноглобулины обнаружены не будут;
• наличием у обследуемого патологий иммунной системы, сопровождающихся нарушением иммунного ответа. В таком случае антитела IgG к Fasciola hepaticagigantica вырабатываются в низкой концентрации или не формируются вовсе. В итоге в крови обследуемого, инфицированного фасциолезом, даже в острую стадию болезни искомые антитела могут не детектироваться. В такой ситуации полученный результат является ложноотрицательным.

В этой связи, при получении отрицательных значений рекомендуется спустя время (14 дней) провести повторный анализ, для достоверного исключения фасциолеза. В особенности повторное тестирование показано при наличии характерной клинической картины.

Для разграничения текущего и перенесенного фасциолеза при положительном результате исследования проводят повторное тестирование через две недели. Нарастание уровня антител и наличие у пациента патологических симптомов свидетельствуют в пользу острого инфекционного процесса.