Антинуклеарный фактор на клеточной линии HEp-2

Анализ крови на антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках

Антинуклеарный фактор на клеточной линии HEp-2 определяют методом непрямой иммунофлюоресценции, чтобы не только диагностировать аутоиммунную патологию, но и предположить ее точный вид в совокупности с другими лабораторно-инструментальными анализами. Тест проводят в профилактических целях при наличии негативной наследственности, но в основном он рекомендуется при появлении типичных симптомов аутоиммунной патологии. Предварительно проходят подготовку, затем сдают венозную кровь для диагностики.

Для чего проводится анализ

При аутоиммунных заболеваниях иммунитет пациента направлен не на выявление и уничтожение патогенных микроорганизмов, а на собственные ткани. Выработка аутоиммунных антител приводит к негативным симптомам. Часто они могут быть схожи для отдельных видов аутоиммунных заболеваний, поэтому требуется провести дифференциальную диагностику посредством оценки состава венозной крови через непрямую иммунофлюоресценцию. Также тест необходим для следующих целей:

• оценка причины продолжительного увеличения температуры тела, боли в суставах неясной этиологии, хронической слабости и усталости, истощения, если остальные причины исключены;
• выявление причин изменений в показателях крови в случае отсутствия или наличия негативных симптомов (увеличение уровня лейкоцитов, скорости оседания эритроцитов, С-реактивного белка, иммуноглобулинов разных видов);
• отслеживание определенного вида системных патологий соединительной ткани;
• определение точного вида ревматической болезни;
• отслеживание степени тяжести аутоиммунной патологии, что напрямую коррелирует с нарастанием антител;
• оценка потребности в иммуносупрессивной терапии для подавления активности иммунитета, чтобы уменьшить или полностью устранить продукцию антител аутоиммунного вида;
• отслеживание эффективности назначаемых методов лечения, чтобы определять качество применяемых препаратов, менять их виды или дозировки, переходить к более радикальным способам.

Первоначально исследование назначают для оценки риска наличия аутоиммунной патологии, а также ее дифференциальной диагностики. То есть выявляют конкретный вид системного заболевания соединительной ткани или ревматической патологии. Затем анализ можно назначать повторно, чтобы отслеживать степень тяжести, эффективность лечения, следить за возможностью рецидива после ремиссии.

Анализ назначает терапевт, эндокринолог, ревматолог. Этот же специалист должен проводить расшифровку полученных данных.

Подготовка

На уровень антител и степень их продукции могут влиять различные внешние и внутренние факторы. Поэтому для получения достоверных данных пациент должен придерживаться методов подготовки:

• передача полноценной информации о лекарствах, которые пациент употребляет на данный момент, лечащий врач может исключить часть из них, чтобы получить сведения о первоначальном состоянии иммунитета и продукции антител (иммуносупрессанты, стероиды);
• запрет приема новых препаратов до проведения лабораторной диагностики;
• отсутствие предварительного лечения при потребности постановки первичного диагноза;
• использование всех назначенных тактик лечения для отслеживания эффективности терапии;
• исключение влияния аллергенов, которые могут спровоцировать повышенную активность иммунитета;
• отсутствие проведения теста в период бактериальной, вирусной, грибковой инфекции, так как это тоже стимулирует работу иммунитета;
• запрет проведения инструментальных методов диагностики, которые сопровождаются выделением даже небольших доз излучения за 1 неделю (рентгенография, компьютерная или магнитно-резонансная томография);
• сдача биоматериала только натощак, последний прием пищи должен осуществляться за 8 часов до анализа, в кабинет медсестры приходят утром натощак (допустимо пить только чистую, негазированную воду);
• запрет употребления алкоголя за 2 суток;
• запрет курения за 30-60 минут до сдачи крови.

Соблюдение всех правил подготовки обязательно. Как только венозная кровь будет собрана, допустимо устранить все ограничения и запреты. Важно помнить, что к лечению можно прибегать только после получения результатов анализа и оценки состояния здоровья лечащим врачом.

Метод исследования

Для отслеживания антинуклеарного фактора на Hep-2 предварительно проводится сбор венозной крови, так как именно туда выделяются все виды иммуноглобулинов, в том числе аутоиммунные антитела. Сбор биоматериала осуществляют в кабинете медсестры. Пациент кладет руку на лабораторный стол, под локоть подкладывают валик. Руку выше локтевой ямкой пережимают жгутом, проводят антисептическую обработку. Набирают кровь в стерильную пробирку с антикоагулянтом, чтобы не допустить образования сгустка крови. Так она остается жидкой на протяжении всего периода исследования. Биоматериал отправляют в лабораторию, где приступают к этапам непрямой иммунофлюоресценции.

1. Получение плазмы. В цельной венозной крови содержатся форменные элементы, которые затрудняют проведение лабораторного теста. Поэтому их требуется отделить, чтобы получить только плазму или сыворотку. Для этого выполняют центрифугирование на высоких оборотах или добавление разделительного геля. Оба способа приводят к выделению плазмы в верхнюю часть пробирки, откуда ее отбирают лабораторным шприцем с одноразовым наконечником. Для каждой пробы этот наконечник меняют.
2. Подготовка эпителиальных клеток Hep-2. Их выращивают отдельно в искусственных условиях на стеклах. После завершения этого процесса проводят фиксацию.
3. Соединение эпителиальных клеток и сыворотки. Предварительно сыворотку разводят, затем соединяют с эпителиальными клетками. Чтобы взаимодействие произошло быстрее, пробу устанавливают в инкубатор со слегка повышенной температурой до пределов человеческого тела.
4. Устранение избытка сыворотки. Проводят промывку, чтобы устранить связавшиеся антитела и сыворотку крови.
5. Добавление меченых антител с флуоресцентным красителем. Процедура требуется для окрашивания, с помощью которого можно определить иммунные комплексы в флюоресцентном микроскопе. Для ускорения этого процесса повторно проводят инкубацию.
6. Микроскопия. Полученный образец устанавливают в микроскопе, отслеживая степень нарастания иммунный комплексов по сравнению с остальными видами антител. Поэтому тест считается полуколичественным. Определяют, в какой области произошло окрашивание эпителиальных клеток, записывая данные в лабораторном бланке.

Полученные результаты отправляют лечащему врачу, чтобы оценить результаты и выявить риск развития аутоиммунной патологии.

Расшифровка анализа

Выделяют разные виды окрашивания антинуклеарного фактора на эпителиальных клетках, в зависимости от чего можно провести разную расшифровку.

1. Гомогенное окрашивание. Краситель равномерно распределяется по клеткам. Такое свойство характерно для системной красной волчанки.
2. Периферическое. Краситель распределяется в ядре. По этим данным можно дифференцировать системную красную волчанку от аутоиммунного поражения печени.
3. Гранулярное. Такой тип окрашивания не специфичен, может встречаться при разнообразных аутоимунных заболеваниях. Дифференциальную диагностику можно определить по крупногранулярному типу свечения. Такое состояние характерно для смешанных патологий соединительной ткани.
4. Нуклеарное. Происходит выработка антител против ядрышек клеток, что часто встречается при болезни Шегрена или склеродермии. Реже такое состояние наблюдается при патологиях эндокринных желез.
5. Центромеры. В организме вырабатываются аутоантитела против центромеры хромосом. Это характерно для склеродермии.
6. Цитоплазматическое. Антитела вырабатываются против тРНК-синтетазы. Такое свойство встречается при полимиозите, дерматомиозите. Реже характерно для билиарного цирроза.

Первоначально у пациента может образовываться одна аутоиммунная патология. Но по мере нарастания степени ее тяжести могут выделяться и другие аутоиммунные антитела. Тогда в ходе лабораторного исследования можно выявить окрашивание клеток на разных уровнях. С помощью этих данных лишь предполагают патологию, но для подтверждения дифференциального диагноза требуется назначение других лабораторно-инструментальных анализов.